Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos, inmóviles o móviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas las especies forman ácido o ácido y gas a partir de glucosa. Su composición antigénica es un mosaico que interrelaciona serológicamente varios géneros y aun familias, muchas de estas bacterias son parásitos de animales y otros patógenos.
Para enjuiciar la calidadde las aguas se recorre a parámetro físico químico y biológico. Los parámetros bacteriológicos tienen mayor importancia para dictámenes higiénicos ; es preciso hallar el número de gérmenes saprófilos o de coli y de bacterias procedentes del intestino humano como indicadores de la contaminación.
Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes, pertenecientes a las enterobacterias que fermentan lactosa con producciónde gas y ácido. Para determinar el número de estas bacterias se suele emplear medio selectivo de endo.
Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente. Estos M.O. con frecuencia difieren entre si en características pequeñas. Las bacterias coliforme suelen encontrarse en el aparto intestinal del hombrey animal . E. Coli, rara vez se encuentra fuera del intestino
Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la lactosa y forman ácido y gas.Son anaeróbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias en medios corrientes, como caldo y agar.
La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se observan con luz refleja.
Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica IMViC (Indol, Rojo Metilo (R.M.), Borges – Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.
La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa que el M:O: produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.
Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O desde el punto de vista sanitario aunque muchos autores an tratado de diferenciar el tipo fecal (e.coli) y el nofecal (A: aurogenes)
Análisis sanitario del H2O
El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la capacidad de dicho M:O: para producir gas a partir de la lactosa.
Filtración:Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensión del H2O.
Cloración:
Es el método más eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se agrega depende del grado de contaminación del abasto hídrico y su contenido de sustancias orgánicas. El cloro mata la mayor parte delas bacterias no esporágenas. El H2O clorada, en consecuencia no siempre es estéril, pero suele brindar seguridad para consumo por el ser humano.
Recuento de Coliformes en Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtración de acetatos de celulosacon poros y diámetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H2O.
La membrana de filtración se coloca asépticamente en una caja de Petri en un cojincillo absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba a 24 ºC durante 24 horas. Después se examina la membrana con microscopio de poca potencia y se cuentan las colonias verdes violáceos con resplandor metálico, si considera que son bacterias coliformes.
H2O potable:Sea limpia,
- Rapidez en la obtención de resultados
Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales si el filtro se lava y se vuelve a utilizar.- Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fácilmente durante un corto tiempo y a una temperatura conveniente.
- No hay indicación de formación de gas (algunas H2O tienen gran cantidad de organismos fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer en el medio).
- La filtración por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos recuentos, porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente.
- Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden interferir en el crecimiento de los coliformes.
Aquí en este experimento se realizó el paso de siembra en profundidad.
El resultado dio negativo, no hubo
Después se dejó por 24 horas mas y tampoco se observó ningún crecimiento, o sea, dio negativa la prueba, es decir, no se determinó la presencia de aeróbios en los experimentos realizados.
Descartamos las El agar empleado fue el agar para el recuento.
Este resultado nos indica que la muestra tomada cumple con la norma COVENIN 2614-1994 (1ª revisión) que dice:
5.2.1: es envase previamente esterilizado,
5.2.2: durante la toma de muestra, el envase deberá sujetarse por la
También está H2O, cumple con las normas COVENIN, donde dice en 3.2, que el H2O tratado es aquella que ha sido sometida a uno o varios procesos químicos o físicos para su adecuación como H2O potable.
Experimento # 2(Coliformes totales)
en esta experiencia la siguientes 6 placas fueron rotuladas (10-1, 10-2 y 10-3), con Agar violeta Rojo Billis (VRBA), a esta placas le agregamos 1 ml de la muestra (a cada una de las 6 placas).
Estas placas la incubamos x 24 horas a 37 ºC, aquí no se presentaron crecimiento de coliforme; el cual nos indica, que el H2O tratado este experimento está debidamente saneada, como lo estipula la norma COVENIN, que el H2O potable debe ser limpia, fresca, sin sabores ni olores desagradables o que cause rechazo de quien la consume.
Esta prueba dio negativa, no hubo crecimiento de bacterias coliforme, por lo ya señalado anteriormente por lo que se considera que el aguaes de calidad o como lo dice COVENIN: agua de calidad es la expresión de todos los factores físicos, químicos y microbiológicos que están presentes en el H2O.
Si la prueba fuese positiva, las colonias tienen que ser roja, dada por los La finalidad de esta experiencia es de observar crecimiento de coliformes totales, en este caso la Escherichia coli que es la especie clásica de este grupo.
Experimento # 3Número Mas Probable de Coliformes (NMP)
En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente amarillo, le agregamos 1 ml de la muestra agregada en los envase de 0,1 peptona y rotulada 10-1; 10-2;10-3.
Cada tubo tiene un tubo Durjam invertido en su interior, si en el interior de este tubo, después de 24 horas no hay formación de gas la prueba es negativa, no hubo crecimiento de presunto coliforme, y efectivamente este fue el resultado obtenido, no hubo presencia de gas en el interior del tubo Durjam.
Nota: cada tubo contenía 10 ml de caldo L.S.T.
Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice en 7.2.3, se considera tubo positivo en la prueba presuntiva aquellas que presenten cualquier cantidad de gas en el tubo Durham y / o Turbiedad después de 24 a 48 horas de incubación.
Este resultado no fue el nuestro, pero para demostrar lo señalado anteriormente, que si no hay presencia de gas, es porque la prueba es negativa, según COVENIN, o sea, que el H2O utilizada para este análisis ha sido adecuadamente físico o químico analizada, para considerarla agua potable.
Cabe destacar que la estimación del N.M.P., se basa en la presunción de que las bacterias se hallan naturalmente distribuida en un medio líquido.Experimento # 4
NMP de estreptococos fecales:
Aquí se procedió igual que el experimento # 3, pero aquí se utilizó caldo glucosado (color rojo)cuando la prueba resulta positiva cambia de un color púrpura a amarilla, pero como no hubo reacción de este microorganismo no presentó el color ya señalado, por lo que se puede indicar que no hubo crecimiento de estreptococos fecales.
A pesar de que el medio estaba nutrido con 0,1 peptona, no se presentó crecimiento, ya que H2O está totalmente curada, por los medios requeridos por COVENIN y el desarrollo está totalmente inhibido.
También hay que tener en Nota:
Los estreptococos fecales son bacterias entéricas que viven en el intestino de los animales de sangrecaliente u del hombre , debido a que S. Fecalis abunda en el intestino grueso del hombre, su presencia en los H2O significa contaminación fecal.
Experimento # 5:Para este experimento se trabajó con agar MacKonkey. Aquí se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtración de acetato de celulosa con poros y diámetro tal (0,45 diámetro) que capte la bacteria en tanto que permita el paso libre del H2O.
La membrana de filtración se coloca asépticamente con una
Después se examina la muestra con un
Cabe decir que este experimento fue realizado por la técnica Nubia de Pérez, fue demostrativo, dio positivo, pero como la prueba anterior nos dieron negativas no lo consideramos como punto de discusión.
El H2O tomada para este análisis fue del
Esta Técnica tiene muchas aplicaciones útiles:
- Se puede examinar grandes volúmenes de H2O; teóricamente casi cualquier volumende agua se puede filtrar a través del
disco y los microorganismos de cualquier volumen quedaran en el disco. - La membrana se puede pasar de un medio a otro con el propósito de seleccionar y diferenciar los microorganismos.
- Se obtienen resultados más rápidos, que con los métodos convencionales.
- Se logran estimaciones cuantitativas de ciertos tipos de bacterias como coliformes, cuando se usan los medios apropiados.
- Tomada de un envase fijo (pipote)
- Hora 11 de la mañana.
"Para la captación de muestras en
5.1.4
"Para muestras de H2O confinadas en depósitos , estanques u otros a profundidades específicas se debe utilizar un muestreo, diseñado de manera tal que el H2O fluya a través de un tubo el fondo de envase de recepción"
con respecto a la hora, fecha y lugar donde fue tomada, COVENIN lo señala en 5.5- Determinación del número mas probable de bacterias coliformes en agua potable.
- Determina presuntos Streptococcus fecalis en la muestra de agua.
- Determinar la veracidad del tratamiento implementado en las H2O potables y hasta que punto reduce el crecimiento de las coliformes.
Así se considera cuando en 100 ml de agua no se encuentran agentes enfermedad, y por tanto no esté presente tampoco la especie E. Coli. Se estima que una persona en promedio excreta al día miles de millones de estos microorganismos que viven mas tiempo en agua que los patógenos. El agua que contenga pocos patógenos por litros puede estar lo suficientemente contaminada para causar algunas enfermedades.
Como estas especies Enterobacteriaceae tienen gran semejanza en su aspecto morfológico y características de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioquímicas para diferenciarlas.- Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce y Ent. Aerógenes no.
- Los dos microorganismos producen ácido de la glucosa, sin embargo, E.coli produce pH mas bajo lo qu ehace que vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color.
- E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent. Aerogenes sí lo hace.
- Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de sodio como su única
fuente de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.
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